衛(wèi)生毒理學-實驗指導:實驗四小鼠精子畸形試驗

來源：南華大學資源網(wǎng) 精品課程網(wǎng)

衛(wèi)生毒理學:實驗指導實驗四小鼠精子畸形試驗:◎<一目的>◎<二　原理>◎<三　儀器及試劑>◎<四　實驗步驟>◎<五　統(tǒng)計方法及結果判定>※<一目的>掌握小鼠精子畸形試驗的基本技術　　返回頂部※<二　原理>　　小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因直接或間接地決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結果。因此形態(tài)的改變提示有關基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的改變。小鼠精

◎<一目的> ◎<二　原理> ◎<三　儀器及試劑> ◎<四　實驗步驟> ◎<五　統(tǒng)計方法及結果判定>

※<一目的>

掌握小鼠精子畸形試驗的基本技術

　　

返回頂部

※<二　原理>

　　小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因直接或間接地決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結果。因此形態(tài)的改變提示有關基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的改變。小鼠精子畸形試驗可檢測環(huán)境因子對精子生成、發(fā)育的影響，而且對已知的生殖細胞致突變物有高度敏感性，故本試驗可用作檢測環(huán)境因子在體內(nèi)對生殖細胞的致突變作用。

返回頂部

※<三　儀器及試劑>

　　全部試劑除注明外，均為分析純，試驗用水為蒸餾水。
　　3.1　實驗室常用設備。
　　3.2　生物顯微鏡。
　　3.3　甲醇。
　　3.4　1%～2%伊紅染色液：稱取伊紅1～2g，溶于100mL蒸餾水備用。

返回頂部

※<四　實驗步驟>

　　4.1　動物
　　6～8周齡(體重25～35g)。
　　4.2　劑量分組
　　設一個陰性對照(溶劑)組，一個陽性對照組及三個試驗組，每組至少有5只存活動物。陽性物可采用環(huán)磷酸胺40～60mg/(kg·d)或甲基磺酸甲酯(MMS)50mg/(kg·d)，絲裂霉素C(MMC)1.0～1.5mg/（kg·d)。最高劑量可取最大耐受量，或分別取1/2、1/4和1/8LD₅₀作為劑量組。經(jīng)口給予，連續(xù)5d。
　　4.3　操作步驟
　　4.3.1　動物處死時間：各種會計資格致突變物作用于精子的不同發(fā)育階段，可在接觸某種致突變物后不同時間出現(xiàn)精子畸形，故有條件時，可給于受試物后第一、四、十周處死動物，檢查精子形態(tài)。因為大部分化學致突變物對精原細胞后期或初級精母m.jfsoft.net.cn/hushi/細胞早期的生殖細胞較為敏感，故一般均是于首次給受試物后的第35d處死。
　　4.3.2　用頸椎脫臼法處死小鼠，取出二側副睪，放入盛有適量生理鹽水(1mL)的小燒杯中或放入盛有2mL生理鹽水的平皿中。用眼科剪將副睪縱向剪1～2刀，靜止3～5min，輕輕搖動。用四層擦鏡紙或合成纖維血網(wǎng)袋過濾，吸濾液涂片�？諝飧稍锖�，用甲醇固定5min以上干燥。用1%～2%伊紅染色1h，用水輕沖，干燥。
　　4.3.3　鏡檢：在低倍鏡下(用綠色濾光片)找到背景清晰精子重疊較少的部位，用高倍鏡順序檢查精子形態(tài)，計數(shù)結構完整精子。精子有頭無尾(輪廓不清)或頭部與其他精子或碎片重疊，或明顯是人為剪碎者，均不計算，每只動物至少檢查1000個精子。
　　精子畸形，主要表現(xiàn)在頭部，其次為尾部，畸形類型可分為無鉤、香蕉形、胖頭、無定形、尾折疊、雙頭、雙尾等。異常精子均應記錄顯微鏡的坐標數(shù)，以備查詢。并分別記錄異常類型，以便統(tǒng)計精子畸形率及精子畸形類型的構成比。
　　判斷雙頭、雙尾畸形時，要注意與二條精子的部分重疊相鑒別，判斷無定形時要與人為剪碎及折疊相鑒別。

返回頂部

※<五　統(tǒng)計方法及結果判定>

　每個劑量組應分別與相應的陰性對照組進行參數(shù)統(tǒng)計方法比較，如用Wilcoson秩和檢驗法評價精子畸形陽性的標準是，畸形率至少為陰性對照組的倍量或經(jīng)統(tǒng)計有顯著意義，并有劑量反應關系。
　　一般陰性對照組的精子異常率為0.8%～3.4%，供參考。但應有本實驗室所用實驗動物的自發(fā)畸形率作參考。

...