實驗目的 1．學習離體在位蟾蜍心臟的恒壓灌流法，觀察前、后負荷和心肌收縮性能對心功能的影響，并描繪心功能曲線的變化； 2．制備實驗性全心衰的動物模型； 3．觀察強心藥物對衰竭心肌的治療作用。 實驗原理 一般作為衡量心功能的指標是心輸出量（心輸出量ml/min=每搏輸出量ml/次×心率 次/min)。在此次實驗中利用離體在位的蟾蜍心臟，消除了神經(jīng)反射對心率變動的影響，所以相當于在心率基本恒定的情況下，主要考慮每搏輸出量對心輸出量的影響。前者反映了心肌舒縮力量與作功的大小，它受前、后負荷和心肌收縮性等基本因素的影響。在一定范圍內(nèi)，回心血量增加，心室舒張末期容積（前負荷)增加，使心肌纖維初長度拉長，心肌收縮力加強，每搏輸出量增加，即F-Starling定律。當心室后負荷（如大動脈壓)增加時，即心室收縮射血克服阻抗增加，心室壁收縮期張力增大，作功增加。醫(yī).學全在線心肌收縮性能改變是指心肌內(nèi)在收縮機制改變所引起的收縮力量的改變，與前、后負荷無關，而可受去甲腎上腺素、乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)和體液因素的影響。改變心肌收縮性能可使心功曲線左移或右移。 本實驗以過度增加心臟的前、后負荷與利用硫酸鎘競爭性抑制Ca2+內(nèi)流，降低心肌收縮性制備出全心衰模型。 洋地黃因使心肌細胞膜Na+-K+-ATP酶活性減低，異丙腎上腺素則作為膜β受體激動劑，對衰竭心肌都有一定治療作用，而普奈洛爾作為β受體阻斷劑，可拮抗β受體激動劑的強心作用。 實驗動物 蟾蜍或蛙 器械、藥物 蛙類手術(shù)器械一套，恒壓灌流裝置一套，10ml量筒，小燒懷，動、靜脈插管，計算，器滴管，坐標紙，任氏液，1：10，000去甲腎上腺素，1：10，000乙酰膽堿，2×10－6～2×10－5硫酸鎘任氏液，0.2％地高辛，0.2%普奈洛爾（按片劑重量計算)，0.001%異丙腎上腺素。 實驗步驟 一、離體在位心臟灌流標本的制備 1、破壞蛙腦和脊髓，將其仰臥放在蛙板上，用外科剪于劍突處向兩側(cè)鎖骨肩峰端呈三角形剪開皮膚，用粗剪剪開胸壁，切勿損傷心臟，剪去胸骨、鎖骨，用蛙釘把兩前肢固定在蛙板上。用鑷子提起心包膜，用眼科剪仔細將其剪開，暴露心臟。 2、分離出左、右主動脈，在其下方穿兩根線備用。用玻璃分針將心臟翻向頭側(cè)，可看到靜脈竇與下腔靜脈（后腔靜脈)。小心分離并剪開與下腔靜脈相連的心包膜組織在其下穿一根線備用。 將剛才穿于主動脈下的其中一根備用線從下腔靜脈下繞過，結(jié)扎此線，便把兩主動脈和下腔靜脈以外的全部血管扎住，結(jié)扎過程中切勿扎到靜脈竇。再把穿于主動脈下方的另一根線結(jié)扎右主動脈。 3、用鑷子夾住下腔靜脈的上壁少許，用剪刀沿鑷子下緣剪一小口，將事先充滿任氏液（不含氣泡)的靜脈插管插入此切口，直至靜脈竇內(nèi)，用備用線結(jié)扎固定。翻轉(zhuǎn)心臟向下，提起左主動脈，在左主動脈盡量長的遠端剪一斜形切口，然后用充滿任氏液的吸管插入心室，沖洗并反復數(shù)次（目的是避免血液堵塞插管)。注意不要進氣泡。 4、將事先充滿任氏液的動脈插管向心性插入，作為心搏出口，并用線結(jié)扎固定。 5、把靜脈插管與橡皮管1相連，但先不打開夾子；把動脈插管與橡皮管2相連 二、觀察項目 1、每分輸出量和有效心功率的計算方法 （1)每分輸出量：用小燒杯收集心臟搏出的灌流液1分鐘，用小量筒測定搏出液量（ml)。同時計數(shù)心率（次/分)。 （2)計算： 有效心功率=心輸出量′心功管高度（側(cè)管高度)′水密度 （g×cm/min)（ml/min) （cm) （1g/ml) （3)肉眼觀察心舒張容積、心肌收縮力量變化。 2、觀察實驗因素對每分輸出量和有效心功率的影響 （1)改變前負荷（后負荷固定)：把皮管2固定在約高于心臟3cm的水平，調(diào)節(jié)貯液瓶高度，使“零點”分別處于5cm、10cm、15cm……等高度，觀察心舒容積和心肌收縮力量的變化，同時分別依次測定各高度下的心輸出量、心率、每搏輸出量并即時算出有效心功率。若有效心功率曲線平移時，便恢復“零點”在5cm的水平。找出最適前負荷（即心臟不過分充盈擴張而心輸出量又較高的“零點”高度)。注意：“零點”在5cm時，搏出量應保持在20~30滴/分（在橡皮管1處用螺旋止水夾控制)。以下個項實驗中所取的固定前負荷=最適前負荷-5cm。 （2)改變后負荷（前負荷固定)：把前負荷固定在“固定前負荷”，改變橡皮管2的高度（每次間距為5cm)觀察并記錄上述（1)中各項指標。 注意：在實驗過程中，每改變一次側(cè)管高度，要穩(wěn)定1~2分鐘，再進行測定。當側(cè)管高度超過心臟代償范圍至有效心功率曲線平移或下降（即心衰)時，就不能再提高側(cè)管高度�；謴推す�2約高于心臟3 cm水平，待心輸出量基本達到本項實驗前的水平并以此作為對照，進行以下的實驗。（下面的各次實驗也遵循此原則)。 （3)心肌收縮性能改變：將前后負荷固定，用滴管將1:10 000去甲腎上腺素1~2滴均勻滴加于心臟表面，待1~2min觀察心率、心輸出量和有效心功率的變化。用任氏液沖洗心臟表面，待心臟活動恢復后，按上法滴加1:10 000乙酰膽堿1~2滴滴于心臟表面，觀察和記錄上述指標的變化。 （4)異丙腎上腺素：用任氏液沖洗心臟表面，把乙酰膽堿沖洗干凈，待心臟活動恢復后，用滴管將0.001%異丙腎上腺素1~2滴均勻滴加于心臟表面，待1~2min觀察和記錄心率、心輸出量和有效心功率的變化。 （5)普奈洛爾：用任氏液沖洗心臟表面，待心臟活動恢復后，按上法滴加0.2%普奈洛爾2~3滴滴于心臟表面，觀察和記錄心率、心輸出量和有效心功率的變化,待出現(xiàn)作用時，立即重復（4)步驟操作。 （6)硫酸鎘：用任氏液沖洗心臟表面，待心臟活動恢復后，用2′10-6M硫酸鎘任氏液代替任氏液灌流心臟，觀察和記錄心率、心輸出量和有效心功率的變化。 （7)強心甙藥物：在用硫酸鎘灌流的心臟出現(xiàn)心衰表現(xiàn)后（心輸出量和有效心功率明顯下降)，用滴管滴加0.2%毒毛旋花子素K（或0.2% 地戈辛)1~2滴于心臟表面，觀察和記錄心率、心輸出量和有效心功率的變化。用任氏液沖洗心臟表面，待心臟活動恢復或接近給予強心甙藥物前狀態(tài)后，用滴管將0.001%異丙腎上腺素1~2滴均勻滴加于心臟表面，待1~2min觀察和記錄心率、心輸出量和有效心功率的變化。 注意事項 1．實驗過程中勿用手捏拿心臟，以免損傷心臟。 2．心臟表面應經(jīng)常滴加任氏液，以保持濕潤。 3．整個實驗過程中，管道不要扭曲。 4. 實驗過程中，應回收、循環(huán)使用任氏液或硫酸鎘任氏液。 | 
