方法名稱： |
復(fù)方丹參片－丹參酮ⅡA的測(cè)定－薄層掃描法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法適用于中藥制劑復(fù)方丹參片。 |
方法原理： |
供試品于索氏提取器中經(jīng)氯仿加熱回流，過(guò)濾，濾液濃縮加氯仿定容，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λS=265nm，λR=378nm測(cè)量丹參酮ⅡA吸收度積分值，計(jì)算其含量。 |
試劑： |
1. 氯仿 2. 甲醇 3. 苯 |
儀器設(shè)備： |
1. 儀器 1.1 索氏提取器 1.2 薄層掃描儀 1.3點(diǎn)樣器 一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。 1.5展開室 可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。 2.材料 高效硅膠G板。 |
試樣制備： |
1. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，加氯仿制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 2. 供試品溶液的制備 精密稱取供試品5g粉碎，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱回流提取至無(wú)色，提取液濃縮加氯仿定容至2mL量瓶中，作為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1.點(diǎn)樣 精密吸取供試品溶液10μL、對(duì)照品溶液4μL與8μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。 2.展開 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以苯-甲醇（9:1)為展開劑，展開至15cm時(shí)，取出薄層板，晾干。 3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取對(duì)照品溶液1，2，3，4，5μL點(diǎn)樣，展開顯色后，掃描測(cè)定，以點(diǎn)樣量對(duì)積分面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 4.含量測(cè)定 在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λS =265nm，λR=378nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。 用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過(guò)原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過(guò)原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正 |
參考文獻(xiàn)： |
伍少雄，黃相蘭. 復(fù)方丹參片中丹參酮ⅡA的薄層掃描法測(cè)定. 時(shí)珍國(guó)藥研究，1997，8（5)：415-416. |
