| 公開(公告)號 | CN1234725C |
| 公開(公告)日 | 2006.01.04 |
| 申請(專利)號 | CN200410026022.1 |
| 申請日期 | 2004.04.07 |
| 專利名稱 | 一種高效快速純化制備片段抗體的方法 |
| 主分類號 | C07K1/16(2006.01)I |
| 分類號 | C07K1/16(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;C12P21/06(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 陳志南 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 米 力;唐 浩;余曉玲;謝 麗 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長樂西路17號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項 | 一種高效快速純化制備片段抗體的方法，其特征在于，采用擴張柱床吸附——陰離子層析濃縮——疏水層析純化三步純化，從細胞規(guī)模培養(yǎng)物中分離純化抗體IgG，酶切后純化制備片段抗體，整個純化工藝的銜接采用同一緩沖系統(tǒng)，通過改變pH值的方法進行洗脫，減少了工藝過程緩沖系統(tǒng)置換的步驟，該方法的步驟為：(1)動物細胞規(guī)模培養(yǎng)物中分離純化抗體IgG，先用StreamlineSP陽離子層析吸附動物細胞規(guī)模培養(yǎng)物中的抗體IgG，得到初步純化的抗體IgG，其過程參數(shù)為：a.StreamlineSP陽離子層析，動物細胞培養(yǎng)物無須澄清和濃縮，用超純水稀釋至電導(dǎo)率為4ms/cm～6ms/cm，吸附條件用緩沖系統(tǒng)A，直接上樣；b.解吸附條件用緩沖系統(tǒng)B，直接洗脫，收集洗脫峰；(2)陰離子層析，抗體IgG被充分濃縮純化；胃蛋白酶酶切獲取F(ab’)2片段；其過程參數(shù)為：a.吸附條件用緩沖系統(tǒng)B，陽離子層析洗脫峰直接上樣；解吸附條件用緩沖系統(tǒng)A，收集洗脫峰，進一步濃縮純化抗體IgG；b.酶切用緩沖系統(tǒng)A，酶與抗體按重量比1∶100混合，37℃水浴反應(yīng)0.5h-2h，調(diào)整pH＝6-8終止反應(yīng)；(3)疏水層析純化片段抗體，其過程參數(shù)為：a.吸附條件用緩沖系統(tǒng)A加入0.8-5M硫酸銨，酶切后的樣品同樣加入0.8-5M硫酸銨，調(diào)節(jié)pH值＝3-6，上樣；b.解吸附條件用緩沖系統(tǒng)A梯度洗脫，收集洗脫峰；上述緩沖系統(tǒng)A為羧基酸緩沖系統(tǒng)，pH＝3-6，濃度0.01-0.1M；緩沖系統(tǒng)B為單價的陽離子或多堿基的陰離子緩沖系統(tǒng)，pH＝7-9，濃度0.01-0.05M。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種從動物細胞規(guī)模培養(yǎng)物中高效快速純化制備片段抗體的方法，采用擴張柱床吸附、陰離子層析濃縮、疏水層析純化方法，擴張柱床陽離子層析吸附大規(guī)模細胞培養(yǎng)物中的抗體IgG，通過改變緩沖系統(tǒng)pH值進行洗脫；收集的洗脫峰即可直接進行陰離子層析；被充分濃縮純化的抗體IgG，直接被胃蛋白酶酶切獲取片段抗體，進行疏水層析純化，最終獲取的片段抗體純度不小于97％，整個純化過程在12小時內(nèi)即可完成。純化工藝的銜接采用同一緩沖系統(tǒng)，通過改變pH值的方法進行洗脫，省去了緩沖系統(tǒng)更換步驟，使前后純化過程銜接緊密；通過陽離子——陰離子色譜結(jié)合的濃縮方法替代傳統(tǒng)的硫酸銨沉淀濃縮方法。具有高效、快速、成本低、純度高、穩(wěn)定、批次間結(jié)果差異小等特點。 |
| 國際公布 |
